Doctorado en Ciencias Biológicas

La capacitación espermática es un proceso fundamental para que se dé la fecundación. En algunos mamíferos se ha determinado que los genes CatSper 1 y la protein kinasa (PKA) se deben expresar para la hipermotilidad y la reacción acrosomal. En el caso de alpacas, aún no se conoce si ocurre lo mismo durante la capacitación in vitro o congelamiento. Por lo tanto, el objetivo del estudio es determinar los cambios moleculares y funcionales durante la capacitación in vitro y congelamiento en espermatozoides de alpaca. Para lograr esto, evaluaremos la expresión y presencia de las proteínas de los genes CatSper 1 y PKA; además, se evaluarán parámetros de funcionalidad relacionados a capacitación en muestras espermáticas no capacitadas, capacitadas in vitro y congeladas. Para esto se va a trabar con 45 pools de eyaculados dividido en 3 grupos: grupo no capacitados; capacitados in vitro, empleando un medio modificado en base a heparina y congeladas con DMSO. La evaluación de la expresión de los genes se determinará empleando RT-qPCR y primers descritos en bovinos. Para identificar la presencia de las proteínas, se aislará mediante la técnica SDS.PAGE y luego se correrá por western blot para lograr identificarla. Los parámetros funcionales por evaluar serán la motilidad, potencial de membrana mitocondrial (JC-1), reacción acrosomal (FITC-PSA), fragmentación del ADN (TUNEL), capacitación (CTC) y ROS (DHR/YO PRO1) y la evaluación de la capacidad fecundante empleando la prueba de unión a zona pelúcida e ICSI. Para la evaluación de la expresión de los genes, usaremos el método Ct delta y la diferencia se determinará con un ANOVA de una vía y la prueba de Tukey con un nivel de significancia de p<0.05. Los parámetros funcionales serán expresados en estadística descriptiva y la diferencia de los patrones de función espermática entre grupos será empleando ANOVA junto con la prueba de rango de Tukey con niveles de significancia de p<0.05. Los resultados del presente estudio permitirán conocer mejor los cambios moleculares y funcionales que involucran la capacitación espermática in vitro en alpacas.

UGARELLI GALARZA ,MARTHA ALEJANDRA