Doctorado en Ciencias Biológicas

La alpaca es un animal de gran importancia socioeconómica para la región altoandina y su crianza contribuye con el progreso hacia los Objetivos de Desarrollo Sostenible y conservación de la biodiversidad. Biotecnologías como la maduración in vitro (MIV) de ovocitos y la producción de embriones in vitro tienen gran potencial para mejorar el éxito reproductivo de esta especie, pero dependen, en gran medida, de la competencia del ovocito y la calidad del embrión. Este proyecto de tesis tiene como objetivo evaluar los cambios en el perfil de expresión de mRNAs que ocurre durante la MIV del ovocito hasta el desarrollo embrionario temprano (DET) en búsqueda de marcadores de la competencia del ovocito y la calidad del embrión. Para ello, se realizarán 3 estudios: 1) Identificación del perfil de expresión global de mRNA durante la MIV y DET mediante la tecnología Single-Cell RNA Seq. En dicho estudio, el mRNA de 1 sola célula de ovocitos inmaduros (VG), ovocitos maduros post MIV (MIV -MII), zigotos por activación partenogenética (Z-AP), zigotos por fertilización in vitro (Z-FIV), embriones de 2 y 8 células por AP (E2-AP, E8-AP), embriones de 2 y 8 células por FIV (E2-FIV, E8-FIV), serán extraídos, convertidos a cDNA para formar librerías y mandados a secuenciar con el sistema de Illumina NextSeq. 2) Validación mediante RT-qPCR de la expresión diferencial de genes de interés en ovocitos con mayor potencial de competencia seleccionados con el colorante azul de cresilo brillante (BCB) y en embriones con potencial de mayor calidad seleccionados por el tiempo de inicio del primer clivaje. En dicho estudio, el mRNA de ovocitos inmaduros teñidos con BCB (BCB+), no teñidos (BCB-), blastocistos con clivaje temprano por AP y FIV, blastocistos con clivaje tardío por AP y FIV serán extraídos, convertidos a cDNA y analizados por qPCR para buscar marcadores moleculares de competencia y calidad embrionaria. 3) Mapeo de la expresión de la proteína “BMP15” durante la MIV del ovocito DET visualizado por microscopía confocal. En dicho estudio la expresión de la proteína BMP15, cuyo transcripto fue expresado diferencialmente en la MIV, será detectada en ovocitos inmaduros, ovocitos maduros, en embriones en estadío de zigoto, de 8 células y blastocisto. Los resultados nos permitirán conocer la dinámica molecular que acompaña al ovocito y al embrión de alpaca durante su desarrollo in vitro; además, nos permitirá identificar potenciales marcadores de la competencia ovocitaria y calidad embrionaria. Todo esto, en conjunto, contribuirá a mejorar el éxito de las biotecnologías in vitro en la obtención de embriones de alpaca.

QUISPE CONISLLA ,JUANA LADY