Producción, purificación y caracterización bioquímica de L-asparaginasa de Bacillus sp. halotolerante

L-asparaginasa (EC 3.5.1.1) es utilizada en el tratamiento de leucemia linfoblástica aguda y enfermedades malignas del sistema linfoide y obtenida de bacterias de origen clínico y ambiental como las especies del género Bacillus, las cuales son muy versátiles y ubicuas. Por ello, el objetivo de la investigación es producir, purificar y caracterizar L- asparaginasa extracelular de una cepa de Bacillus sp halotolerante. En este contexto, primero se seleccionará una cepa de Bacillus sp. productora de L-asparaginasa a partir de un cepario de bacilos Gram positivos aislados de ambientes salinos de diferentes regiones del Perú. En seguida, los parámetros óptimos de producción de la enzima serán determinados evaluando independientemente cada factor y por la interacción de factores utilizando la metodología de superficie de respuesta, entre estos se incluyen temperatura, pH, agitación, fuentes de nitrógeno, carbono y tiempo de cultivo. Después, la L-asparaginasa se concentrará por precipitación salina y se purificará mediante cromatografía de intercambio iónico, cromatografía de exclusión por tamaños y ultrafiltración. Por último, la enzima se caracterizará por técnicas bioquímicas para determinar las condiciones óptimas de reacción y estabilidad, constantes cinéticas,termoestabilidad, citotoxicidad, entre otros. Se espera encontrar una L-asparaginasa extracelular con baja actividad glutaminasa, con gran afinidad por L-asparagina que actúe a pH 7,0; 37 °C, resistente a proteasas humanas.