Determinación de complejos cúmulo ovocitos (COCs) competentes, mediante la tinción azul brillante de cresilo, obtenidos por aspiración folicular (OPU) en alpacas (Vicugna pacos)

La producción in vitro (PIV) de embriones en alpacas es limitada por la escasez de ovocitos de buena calidad, principalmente obtenidos de ovarios de camal; por ello es necesario mejorar la fuente de obtención de ovocitos y encontrar un predictor fiable de calidad y competencia ovocitaria. Seleccionar complejos cúmulo ovocitos (COC’s) competentes con capacidad de fecundación y posterior desarrollo embrionario es uno de los aspectos prioritarios en los procedimientos de fecundación in vitro (FIV). El presente proyecto de tesis tiene como objetivo evaluar la eficacia de la tinción Azul brillante de Cresilo (BCB) para seleccionar COC’s competentes, como alternativa al método tradicional (M.T.) de selección de COC's en base a las características morfológicas. El desarrollo de la parte experimental se llevará a cabo en el Laboratorio de Biotecnología Reproductiva, del Laboratorio de Reproducción animal, de la FMV-UNMSM. El tamaño de la muestra se calculó con la fórmula de diferencia de proporciones, dando como resultado 62 ovocitos. Para el experimento, se utilizarán 11 alpacas hembra adultas de 6 años en promedio, raza Huacaya, en crianza estabulada, las cuales serán sometidas a un protocolo de estimulación hormonal con 100 mg de Hormona Folículo Estimulante (FSH) y 125 UI de Gonadotropina Coriónica Equina (eCG) por animal, con el fin de estimular un desarrollo folicular múltiple y posteriormente realizar la recuperación de COC's de manera repetitiva mediante la técnica de aspiración folicular transvaginal guiada por ultrasonografía (OPU). Los COC's recuperados serán evaluados por el M.T. y luego teñidos con BCB. La evaluación mediante el M.T. contempla 4 categorías y considera seleccionables los de grado 1 y 2. Luego, serán sometidos a la selección por BCB, después de ser expuestos a la tinción se tendrá 2 resultados: ovocitos que presenten citoplasma azul y se consideran competentes (BCB +), y ovocitos con citoplasma incoloro considerados no competentes (BCB-). Los resultados contribuirían a evaluar la eficacia de la tinción BCB para seleccionar ovocitos de calidad obtenidos por OPU, buscando mejorar la PIV de embriones en alpacas. Para analizar los datos obtenidos se utilizará la prueba estadística Chi Cuadrado y para el procesamiento de datos se utilizará el paquete de datos R-Studio.

CORNELIO DIAZ ,VICTOR HUGO