Detección de frecuencia de mutaciones en los genes 23S ARNr y penA que confieren resistencia a azitromicina y cefixime en Neisseria gonorrhoeae en muestras rectales en hombres que tienen sexo con hombres

INTRODUCCION Y JUSTIFICACION La gonorrea es una ITS causada por la bacteria Neisseria gonorrhoeae que produce millones de casos nuevos cada año a nivel mundial. Tiene la particularidad de presentarse de manera asintomática, sobre todo en localización extragenital (recto y faringe) y produce diversas complicaciones. La población de Hombres que tienen sexo con hombres (HSH), ha sido una de las más afectadas por esta infección debido a sus conductas sexuales. La tasa de infección en HSH se ha visto incrementada desde el año 2010. En el Perú, la prevalencia de infecciones por N. gonorrhoeae extragenital en HSH oscila entre un 6 a 10%. La problemática actual con esta bacteria, es que ha desarrollado resistencia a cada uno de los antimicrobianos usados en el pasado para su tratamiento, entre las que se encuentran sulfonamidas, penicilinas, tetraciclinas y finalmente a quinolonas, las cuales fueron utilizadas para el tratamiento hasta que se reportó el desarrollo de resistencia. En el año 2018, la Organización Mundial de la Salud (OMS) publicó una alerta epidemiológica para el tratamiento de gonorrea en lugares con casos de resistencia. En el Perú ya existen reportes microbiológicos de resistencia a azitromicina en 15.6% y de resistencia a ceftriaxona de 4.2%; sin embargo, estos datos son netamente a nivel fenotípico, los datos relacionados a la frecuencia de mutaciones detectadas a nivel molecular que confieren resistencia a azitromicina y cefixime son desconocidos o no reportados aún en nuestra población. Si bien es cierto, la OMS ha cambiado las guías de tratamiento para N. gonorrhoeae debido al aumento de la resistencia, sin embargo, el tratamiento otorgado en nuestro país sigue siendo empírico y sintomático, por tanto, se hace necesario tener la información actualizada de resistencia en N. gonorrhoeae debido al incremento de esta enfermedad a nivel mundial. METODOLOGIA Estudio de tipo descriptivo, transversal que considerará 116 muestras, tomadas entre los años 2019-2020, de hisopado rectal positivas para N. gonorrhoeae, provenientes de participantes HSH. Las muestras fueron colectadas con hisopo y resuspendidas en el buffer del kit de colección del ensayo Aptima Combo 2 (AC2, Hologic, San Diego CA). Se seleccionaron las muestras positivas para N. gonorrhoeae y almacenadas a -80°C hasta su posterior uso. Se realizará la estandarización de extracción de ADN a partir del buffer de transporte de Aptima, comparando los métodos de fenol cloroformo y columnas (Qiamp DNA Minikit, Qiagen). Para la detección de mutaciones en los genes 23S ARNr y penA, se realizará la técnica de Reacción en cadena de la Polimerasa (PCR) en tiempo real utilizando primers que detectan mutaciones específicamente, posterior a ellos se realizara una PCR convencional para envío a secuenciamiento de nueva generación (NGS) y poder comparar los electrofereogramas de las muestras con las de cepas wild type y mutantes en búsqueda de mutaciones que confieren resistencia en ambos genes. Para el análisis estadístico se utilizará el programa STATA versión 15.0 (Stata Corporation, College Station, Texas, EE.UU). OBJETIVOS PRINCIPAL: Determinar la frecuencia de mutaciones en el gen 23S ARNr y el gen penA que confieren resistencia a azitromicina y cefixime en N. gonorrhoeae en muestras rectales de hombres que tienen sexo con hombres ESPECIFICOS: 1. Comparar 2 métodos de extracción de ADN de Neisseria gonorrhoeae a partir del buffer de transporte de utilizado para el tamizaje por Amplificación mediada por transcripción (Aptima) 2. Determinar la frecuencia de las mutaciones C2611T y A2059G en el gen que codifica el 23S rRNA de Neisseria gonorrhoeae que confieren resistencia a azitromicina. 3. Determinar la frecuencia de alteraciones en las posiciones de aminoácidos 375-377, 501, 542 o 551 del gen penA de Neisseria gonorrhoeae que confieren resistencia a cefixime. 4. Determinar la frecuencia de mutaciones en el gen penA en mosaico por secuenciamiento de nueva generación

VASQUEZ VASQUEZ ,FRANCESCA ROSALIA DE MARIA