SELECCIÓN MORFOCINÉTICA EN EMBRIONES BOVINOS SEGÚN POTENCIAL DE IMPLANTACION UTILIZANDO TECNOLOGÍA DE MONITOREO CONTINUO-TIME LAPSE SYSTEM

En bovinos, en los últimos años, la producción de embriones in vivo e in vitro ha incrementado exponencialmente superando 1´400,000 de embriones, convirtiéndolo en una de las tecnologías reproductivas de mayor avance. Sin embargo, selección tradicional de embriones bovinos obtenidos in vitro para su posterior transferencia se basa fundamentalmente en las características morfológicas. Siendo esta subjetiva e inadecuada, debido a la baja y variable correlación con la tasa de éxito en la implantación, en bovinos (37 %) y humanos (30%). Por lo tanto, se requieren nuevos criterios no invasivos que permitan una selección objetiva y más precisa de los embriones. El objetivo del trabajo es diseñar modelos matemáticos para la selección morfocinética de embriones bovinos producidos in vitro según potencial de implantación utilizando tecnología Time Lapse System (TLS). Para ello se desarrollarán 03 experimentos. En experimento I, los ovocitos obtenidos de ovarios de matadero, se madurarán (22h) y fecundarán (18h) in vitro en condiciones de 5% C02 y 90 % Hd a 38°C. Los presuntos cigotos serán distribuidos en dos tratamientos: T1, los cigotos (n=16, r=10) serán cultivados individualmente en microposillos en TLS por 7 días, en medio de cultivo. El T2, los cigotos serán transferidos en grupos (n=25, r=10) al oviducto de conejas (recipiente temporal) previamente sincronizadas para cultivo in vivo. Posteriormente las receptoras serán sacrificadas a los días (D1, D3, D5 y D7) para recuperar los embriones por lavado de oviducto y útero y así comparar la morfocinética y expresión de genes del desarrollo embrionario in vivo vs in vitro. En experimento 2 y 3, los ovocitos serán obtenidos por Ovum pick up de donantes vivas superestimuladas. Los cigotos (n=16, r=20) serán cultivados individualmente en micropocillos en Time Lapse System por 7 días, en medio de cultivo, evaluando los tiempos de división celular in vitro (t2, t3, t4, t5, t8, tM y tB) en video continuo durante los 7 días. Posteriormente, los blastocistos serán sometido a evaluación post eclosión in vitro e implantación post transferencia a receptoras sincronizadas. Los datos generados por TLS serán ordenados retrospectivamente por su viabilidad e implantación y sometidas a análisis de regresión logística binaria, para construir modelos matemáticos no invasivos de predicción de competencia embrionaria en bovinos con precisión.