Efecto del homólogo de fosfolipasa A2 miotóxica "BaMtx" de Bothrops atrox en la expresión génica: Comprendiendo la capacidad antitumoral y miotóxica

BaMTx es un homólogo de PLA2 presente el veneno de la serpiente Bothrops atrox, la especie de mayor relevancia clínica en Sudamérica. Esta proteína exhibe una elevada actividad miotóxica y edematogénica. No obstante, la capacidad citotóxica de BaMtx sobre las líneas celulares de cáncer de mama MDA-MB-231 y MCF7 ha sido reportado recientemente. Los mecanismos de acción celulares que perjudican la viabilidad e inducen la muerte se concentran en la desregulación del ciclo celular y la alteración del metabolismo citosólico y mitocondrial. Sin embargo, se desconocen los mecanismos moleculares subyacentes tales como la desregulación de la expresión génica. Es así que el presente proyecto tiene como objetivo evaluar el efecto de BaMtx sobre la expresión de genes relacionados al metabolismo (y bioenergética) de células cancerígena y normales. Para lograr ello, el trabajo contempla 4 objetivos específicos. 1) Obtener BaMtx al estado puro a partir del veneno de Bothrops atrox, 2) obtener la versión recombinante de la BaMtx en Pichia pastoris, 3) determinar los niveles de expresión génica relacionados con el metabolismo celular en órganos de tejido murino: hepático y muscular y 4) determinar los niveles de expresión génica relacionados con el metabolismo celular en líneas celulares tumoral y no tumoral. Metodológicamente, el trabajo partirá de la purificación de BaMtx mediante técnicas cromatográficas; seguido del diseño y producción de BaMtx recombinante en células de la levadura Pichia pastoris. Se compará funcionalmente ambas versiones de BaMtx, nativa y recombinante, enfatizando en las actividades biológicas. Después, ratones de la cepa Balb-c y células MDA-MB-231 (cáncer de mama triple negativo) y RMF-621 (fibroblastos mamarios) serán tratadas con BaMtx recombinante. Finalmente, se obtendrá ARNm de los modelos murino y celular para evaluar los cambios o no en la expresión de genes de interés metabólico mediante análisis por qPCR. Asimismo, nos comprometemos con la formación de capital humano con la sustentación de dos tesis a nivel de posgrado y la contribución al conocimiento científico a través de al menos dos artículos publicados en revistas científicas de alto impacto. El impacto que se espera es poder proponer a la BaMtx como un principio activo con potencial en biomedicina enfocado en el campo oncológico.