KNOCKOUT DEL GEN DE LA MIOSTATINA MEDIANTE CRISPR CAS9 EN CUY (Cavia porcellus) PARA INCREMENTAR LA MASA MUSCULAR

El gen Miostatina (MSTN) o Factor de Crecimiento y Diferenciación-8 (GDF8) codifica una proteína que regula la miogénesis (Thomas et al. 2000). Joulia-Ekaza et al. (2006) confirmaron la importancia de la miostatina, como regulador negativo del crecimiento muscular en mamíferos, ya que inhibe de forma indirecta la proliferación de mioblastos. Por lo tanto, una mutación de este gen conduce a un incremento en la masa muscular, así como en el tamaño del animal (McPherron,1997, Grobet et al. 1997), fenotipo conocido como doble musculatura. El cuy (Cavia porcellus) es un mamífero roedor originario de las zonas andinas de América, el cual constituye un producto alimenticio de alto valor biológico. Sin embargo, su desarrollo, tecnificación, crianza y mejora genética no han avanzado en el tiempo a comparación con otras especies de interés zootécnico (Moreno 1994). En los últimos años una técnica CRISPR CAS9, ha promovido y facilitado drásticamente nuestra capacidad para editar genomas (Mei et al. 2016), que al inducir mutaciones en genes de interés puede acelerar la expresión de características de valor biológico y económico (Yuan et al. 2019). CRISPR CAS9 es el método elegido por su facilidad, alta eficiencia y éxito en muchas especies como porcinos, conejos, cabras, búfalos y pollos (Guo et al. 2016). El objetivo del presente estudio es generar una línea de cuyes de doble musculatura mediante la técnica del Knock out de MSTN por CRISPR CAS9. El trabajo se dividirá en cuatro partes: a) Establecer una metodología del Knockout de MSTN en cigotos de cuy. b) Evaluar la eficiencia del Knockout de MSTN en cigotos de cuy mediante ADN sequenciamiento, c) Evaluar el nivel de expresión génica y proteica de MSNT a nivel de embriones, fetos y/o gazapos generados del grupo knock out de MSNT vs control (wild type). d) Evaluar la calidad y cantidad de la masa muscular de cuyes de 90 días generados por knock out del gen MSNT vs control (wild type). El complejo CRISPR CAS9 se diseñarán con RNA guías que empalmen con la MSTN y mRNA del CAS9, siendo introducidos por electroporación en los cigotos de cuy. Los animales generados por esta técnica serán criados en jaulas grupales aislados del grupo control.