Potencial uso de antígenos recombinantes para la discriminación de la etapa aguda y crónica de Toxoplasmosis en pacientes con VIH/SIDA

La toxoplasmosis es una infección causada por el parásito Toxoplasma gondii (TG). Actualmente, la enfermedad afecta aproximadamente a un tercio de la población mundial, y representa un riesgo en salud pública principalmente en pacientes inmunocomprometidos (pacientes VIH/SIDA y mujeres embarazadas). La identificación de la presencia de infección por TG es vital en estas poblaciones, ya que la reactivación del estadio latente del parásito puede conducir a dos manifestaciones clínicas con afecciones severas y mortales: Toxoplasmosis cerebral, la cual afecta entre el 10 – 50 % de lesiones relacionadas con el VIH en aproximadamente el 95 % de los casos y Toxoplasmosis congénita, con porcentajes de seropositividad elevados para anticuerpos IgG en mujeres embarazadas (>60 %), sin embargo, los reportes de anticuerpos IgM en mujeres embarazadas, y recién nacidos muestran seropositividad baja, son escasos y aislados. La etapa aguda de la enfermedad se presenta cuando existe: (i) Infección reciente del parásito por ingestión de quistes tisulares, ooquistes o transfusión sanguínea donde la replicación activa del parásito conduce a una respuesta celular y humoral con anticuerpos IgA, IgE o IgM y (ii) Reactivación del estadio latente del parásito, generando una etapa de replicación activa, la etapa crónica de la enfermedad se establece cuando existe enquistamiento del parásito en los órganos diana, predominando una respuesta humoral con anticuerpos IgG. Lograr la discriminación de ambas etapas mediante un diagnóstico rápido, costo-efectivo y de fácil acceso para establecer un régimen oportuno de tratamiento ha representado un problema entre la comunidad científica. Actualmente la tomografía axial computarizada (TAC) es la técnica estándar de oro para el diagnóstico de toxoplasmosis cerebral que permite identificar la presencia de lesiones hipodensas dentro del parénquima cerebral; sin embargo, solo el 30 % de pacientes desarrollan las lesiones, porque la inmunosupresión genera disminución del realce en las lesiones lo que dificulta su diagnóstico por imágenes y en consecuencia es necesario recurrir a pruebas moleculares (qPCR) o serológicas (ELISA, Western Blot), las cuales, presentan problemas como: (i) Métodos con porcentajes de sensibilidad y/o especificidad heterogéneos, dependientes de la naturaleza del antígeno, (ii) Tipo de muestra a utilizar y (iii) Equipos utilizados usualmente de difícil acceso. Por lo expuesto, la presente propuesta de investigación busca aprovechar el uso de 3 proteínas (GRA1, GRA7 y GRA8) de T. gondii involucradas en el proceso de invasión celular, replicación, mantenimiento y evasión de la respuesta inmune, este grupo de proteínas ha demostrado ser altamente inmunogénicas y permitir la detección de anticuerpos asociadas a la etapa aguda (GRA8) y crónica (GRA1-GRA7). Nos proponemos a obtener estas proteínas antigénicas de manera recombinante empleando dos sistemas de expresión (E. coli y Baculovirus) y evaluar su aplicación para discriminar la etapa aguda y crónica en pacientes con VIH/SIDA mediante las técnicas serológicas Western Blot (evaluación de antígenos individual) e Inmunocromatografía (evaluación de antígenos en conjunto) para el desarrollo del kit de diagnóstico rápido con la finalidad de que este kit sea aplicado en todos los centros médicos a nivel nacional permitiendo el diagnóstico rápido y de bajo costo en las demás poblaciones de riesgo, como mujeres embarazadas y recién nacidos que desarrollan Toxoplasmosis congénita.