VALOR CLINICO DE LA PCR DIGITAL PARA LA DETECCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE M.TUBERCULOSIS EN MUESTRAS EXTRAPULMONARES

La tuberculosis (TB) es una enfermedad crónica que amenaza la salud pública mundial por muchos años, con millones de personas infectadas y muertes cada año, afectando a las poblaciones de bajos recursos económicos. El Perú es uno de estos países con alta incidencia de tuberculosis en la población infantil, adolescente y adulta y con aumento sostenible de casos multidroresistente. Los indicadores epidemiológicos de la TB en todas sus formas se mantienen altos: morbilidad alrededor de 119/100 mil habitantes, tasa de letalidad de 3.8 y tasa de mortalidad de 3.7. Tres métodos de diagnósticos son usados en la detección de la TB: baciloscopia, cultivos y detección del ADN de la micobacteria mediante PCR (tiempo real). Pruebas eficientes cuando las muestras tienen alta carga bacilar, como ocurre en los casos de tuberculosis pulmonar. Cuando la carga bacilar es baja, pacientes asintomáticos y con TB extrapulmonar, la sensibilidad y especifica de las técnicas de detección disminuye. La TB extrapulmonar en todas sus formas (meníngeas, hepática, otras) pueden a representar hasta el 40% de las tuberculosis y necesitan mejorar las técnicas de moleculares de análisis. El monitoriamiento de la carga bacilar en los pacientes durante el tratamiento requiere la cuantificar exacta de la bacteria. En estos casos, las pruebas moleculares como la PCR tiempo real presenta limitaciones. Los pacientes con tuberculosis no diagnosticados oportunamente son una fuente potencial de infección de la enfermedad como ocurre en los casos de las TB extrapulmonar. El objetivo del proyecto es mejorar la prueba molecular para detectar y cuantificar el ADN de M. tuberculosis en muestras extrapulmonares, para un diagnóstico rápido, preciso y oportuno tratamiento clínico de la tuberculosis. La PCR digital en gotas (ddPCR) cuantifica y detecta del ADN más eficientemente cuando la carga bacilar en baja, como sucede en los casos extrapulmonar. No necesita curva estándar de calibración para cuantificar el ADN, no necesita ADN referencia de M. tuberculosis. Se basa en la partición de la reacción inicial de PCR en microvolumen y cada participación (miles) actúa como una PCR individual. Además, disminuye cualquier efecto inhibitorio en la PCR. Mediante una sola reacción se genera cientos de miles de nanoreacciones de PCR, generando decenas de miles resultados. Esto hace una prueba molecular muy robusta de análisis.