Rol de las metalochaperonas putativas de pirazinamidasa en el mecanismo de acción y resistencia a pirazinamida en Mycobacterium tuberculosis.

La tuberculosis (TB) es una de las primeras causas de muerte en el mundo. Esta enfermedad se ve agravada por la aparición de cepas de Mycobacterium tuberculosis multi-drogo resistente. La pirazinamida (PZA) es un fármaco de primera línea; sin embargo, la aparición de cepas resistentes representa un creciente problema de salud pública mundial. A pesar de la relevancia de la PZA, no se comprende el mecanismo de acción y resistencia a esta droga. Las mutaciones en el gen pncA, que codifica a la pirazinamidasa, son los principales responsables de la resistencia a esta droga; sin embargo, existen cepas resistentes (25%) que carecen de estas mutaciones, sugiriendo la presencia de otros mecanismos de resistencia. La enzima pirazinamidasa es una metaloenzima, la cual requiere la presencia de cofactores metálicos para su activación, los cuales podrían ser entregados a la enzima mediante un proceso asistido por metalochaperonas. Hipótesis. Al menos una metalochaperona activa a la apo-pirazinamidasa y la remoción de al menos un par de metalochaperonas afecta la susceptibilidad a PZA. La metodología a utilizar es experimental. La metodología integral combina técnicas de biología molecular y microbiología. La clonación, transformación y purificación de proteínas se realizará mediante cromatografía por afinidad. La técnica ORBIT permitirá la eliminación precisa de genes, y los análisis de RT-qPCR proporcionarán un panorama detallado de las respuestas genéticas. Objetivos. Evaluar el papel de las metalochaperonas putativas en la resistencia a la pirazinamida (PZA) en M. tuberculosis, enfocándose en genes como Rv2059, Rv2102, Rv0944 y Rv1852. Objetivos específicos: 1. Reactivar la pirazinamidasa con metalochepronas recombinantes (Rv2102, Rv0944 y Rv1852); 2.Evaluar el efecto de la remoción doble de los genes de las metalochaperonas en el eflujo de ácido pirazinoico y la susceptibilidad a PZA y 3. Evaluar la expresión genética en M. tuberculosis en los que se ha removido las metalochaperonas. Resultados esperados. Reactivación de la actividad de la pirazinamidasa al menos por una metalochaperona; efecto en la susceptibilidad de PZA por la remoción de metalochaperonas. Esperamos: 2 tesis de posgrado presentadas para sustentación; 2 artículos aceptados en revistas indizadas en Scopus y 1 ponencia internacional. Impacto. La profundización en la comprensión de las metalochaperonas en M. tuberculosis tiene el potencial de transformar las estrategias terapéuticas actuales, aportando significativamente a la lucha contra esta enfermedad global.