Efecto de knock down de los genes que codifican a bombas de eflujo (Rv3756C, Rv1667C y Rv3008) en la resistencia a pirazinamida en Mycobacterium tuberculosis

La bacteria Mycobacterium tuberculosis (MTB) es el agente causante de la Tuberculosis (TB), una enfermedad que en el año 2020 provocó 1,5 millones de defunciones a nivel global. En este contexto, la pirazinamida (PZA) se destaca como un agente antimicrobiano de primera línea que ha reducido la duración del tratamiento de 9-12 meses a 6 meses, sin embargo, la creciente resistencia microbiana plantea serias inquietudes en la esfera de la salud pública. La principal manifestación de resistencia a la PZA deriva de mutaciones en la secuencia génica del pncA, que codifica la enzima PZAsa responsable de metabolizar la PZA a su forma activa, ácido pirazinoico (POA); no obstante, aproximadamente un 30% de las cepas resistentes exhiben otros mecanismos de resistencia vinculados a bombas de eflujo de POA, la proteína ribosomal S12 (rpsA) y la aspartato descarboxilasa (panD). Las bombas de eflujo son proteínas de membrana que permiten la extrusión de drogas. Estudios previos demostraron, mediante el análisis de las proteínas que se unen al POA en el proteoma microarray de M. tuberculosis, que una sobrexpresión de genes que codifican para bombas de eflujo, aumenta su resistencia específica a PZA. Por lo tanto, el presente estudio seleccionó los genes Rv3756c, Rv3008 y Rv1667c, que codifican a bombas de eflujo y están relacionados en la resistencia a pirazinamida, para generar knock down en los genes o ver la depleción génica mediante CRISPRi de interferencia y así evaluar la velocidad del flujo de POA a través del test de Wayne en MTB y evaluar su resistencia, a través de la susceptibilidad a PZA usando el ensayo "Tetrazolium Microplate Assay" (TEMA).

ARICOCHE DEL CAMPO ,KIARA BEATRIZ