DISEÑO Y VALIDACIÓN DE UN ENSAYO ULTRASENSIBLE BASADO EN CRISPR PARA EL DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL DE INFECCIONES FEBRILES EN LA AMAZONÍA PERUANA

El síndrome febril inespecífico, puede definirse como un inicio brusco de fiebre, con una evolución de siete días aproximadamente, en el cual no se ha identificado signos o síntomas relacionados con un foco infeccioso. La etiología, es variable (virus, bacterias o parásitos), y puede comprometer la vida del paciente. Cada nicho ecológico-social, puede determinar diversos perfiles etiológicos prevalentes. Así por ejemplo en las regiones amazónicas, se debe considerar las etiologías parasitarias (malaria), bacterianas (leptospirosis, bartonelosis, peste), virales (arbovirosis) entre otras. Este proyecto tiene como desafío desarrollar un ensayo ultrasensible y de bajo costo basado en la tecnología CRISPR-Cas12/13 (plataforma SHERLOCK) para la detección diferenciada de cuatro patógenos que causan síndrome febril en la región de Amazonas del Perú: Plasmodium vivax, Plasmodium falciparum, Leptospira sp. y el virus del dengue. Estos patógenos pueden causar síntomas similares en su etapa inicial, lo que puede llevar a diagnósticos erróneos, dificultando el tratamiento adecuado de los pacientes. Por lo tanto, un diagnóstico diferencial en el punto de atención es esencial para optimizar el manejo clínico y reducir la carga de estas enfermedades. La alta especificidad del sistema CRISPR-Cas junto con la sensibilidad de las técnicas de pre-amplificación (mediante métodos isotérmicos o PCR) de la secuencia genómica diana permite una detección extremadamente precisa y sensible de los ácidos nucleicos. Además, la detección basada en CRISPR ofrece un tiempo de lectura rápido de resultados y puede integrarse con diferentes formatos de lectura fáciles de usar y dispositivos portátiles para aplicaciones en el punto de atención de pacientes (‘point of care’, POC). Al finalizar el proyecto, tendremos un prototipo validado tanto a nivel de laboratorio y en campo con alto potencial de transferencia tecnológica al Instituto Nacional de Salud. La sostenibilidad de la propuesta se basa en la capacidad del escalamiento productivo y la obtención de financiamiento adicional por parte del Instituto Nacional de Salud del Perú (INS). El proyecto es desarrollado y coordinado por El Instituto de Investigación en Enfermedades Tropicales de la Universidad Nacional Toribio Rodríguez de Mendoza (IET-UNTRM) de Chachapoyas, con la participación de entidades asociadas con amplia experiencia en el diseño y optimización del ensayo la metodología CRISPR como la Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC), y Universidad Peruana Cayetano Heredia (UPCH). El INS, que proporcionará muestras clínicas y realizará la validación del ensayo, junto con el IET-UNTRM. La DIRESA Amazonas es la entidad colaboradora con quien se llevará a cabo la validación en campo utilizando muestras y pacientes de la región Amazonas. El desarrollo de este prototipo diagnóstico, basado en la tecnología CRISPR, tendrá un impacto directo en la reducción de la vulnerabilidad del sistema de prevención en la salud pública peruana. El prototipo permitirá una detección rápida, precisa y de bajo costo de infecciones febriles en áreas rurales endémicas, donde las herramientas diagnósticas actuales son limitadas. Este proyecto también establecerá un modelo replicable para el desarrollo de diagnósticos moleculares para otras enfermedades infecciosas, contribuyendo a la autonomía biotecnológica del Perú. De esta manera, el país estará mejor preparado para responder a futuros desafíos en salud pública.