Desarrollo de la tecnología de imágenes de masas con espectrometría de masa maldi tof tof, in vitro sobre medios gelosados e in situ sobre cortes congelados, considerando biomarcadores peptídicos, lipidómicos y metabolómicos de bacterias asociadas a la co

La espectrometría de masa MALDI TOF TOF ha revolucionado los análisis biológicos, por una parte a nivel microscópico en histología, sobre cortes de tejidos, y por otra parte a nivel macroscópico como por ejemplo colonias microbianas o de insectos. En el caso de moléculas cuyas masas no están catalogadas, la fragmentación y la determinación subsecuente de los valores de masa de los fragmentos (MALDI TOF TOF) permiten caracterizar e identificar moléculas simultáneamente a su visualización. Además, las moléculas visualizadas son también semi-cuantificadas por el espectrómetro MALDI TOF/TOF. Esta tecnología, conocida como “imágenes de masas”, está cerca de revolucionar la biología del nivel molecular, tanto a nivel de microorganismos como de organismos. En el marco del presente proyecto, la metodología de imágenes de masas será desarrollado en la Facultad de Ingeniería Pesquera (FIP) de la Universidad Nacional de Tumbes (UNT), considerando el modelo concha negra / bacteria, el objetivo siendo él de establecer protocolos optimizados de imágenes in situ sobre cortes congelados e in vitro sobre colonias bacterianas. Estos protocolos optimizados de imágenes de masas concernirán los diversos tipos de biomarcadores moleculares: proteínas/péptidos, lípidos, metabólitos. En el marco del proyecto, será posible establecer y optimizar un conjunto de protocolos de imágenes de masas, por una parte a nivel microscópico sobre cortes histológicos congelados de concha negra, y por otra parte a nivel macroscópico sobre medio gelosado con colonias bacterianas. En lo que conciernen las imágenes de masas sobre cortes congelados, la optimización de protocolos se enfocará en la técnica de vaporización de la matriz variable en función de la naturaleza des moléculas investigadas (proteínas, lípidos, metabólitos). En el caso de las imágenes de masas de proteínas y péptidos, la optimización del protocolo apuntará también la técnica de digestión in situ por la tripsina. Se realizarán análisis sobre diversos tejidos de concha negra en situación de infección bacteriana experimental y posteriormente natural. Análisis de detección de biomarcadores bacterianos peptídicos y lipídicos serán practicados sobre cortes congelados, lo que abrirá la vía a una nuevo enfoque para el diagnóstico de infecciones bacterianas en acuacultura, así como para la caracterización molecular de las interacciones huésped-bacterias (Peng, 2013). En lo que conciernen las imágenes de masas de colonias bacterianas sobre medio gelosado, la optimización de protocolos apuntará también en la matriz en función de los metabólitos investigados. Los trabajos serán enfocados en la visualización e identificación molecular de los metabólitos implicados en las interacciones in vitro entre bacterias patógenas y bacterias o hongos probióticos (Moree et al., 2012; Yang et al., 2012; Traxler et al., 2013). Estos trabajos conducirán a une caracterización sumamente precisa con biomarcadores diversificados del microbioma de la concha negra haciendo un modelo original para los moluscos cuya microbiota aún está poco estudiada y limitada a enfoques de tipo T-RFLP (Fernandez-Piquer et al., 2012).

EF-015 - Investigacion Postdoctoral en Perú - Continuadores